Corantes Tandem

Corantes Tandem

Um conjunto é composto por duas moléculas fluorescentes ligadas covalentemente (uma das quais funciona como o dador e o outro como aceitador) que funciona como se fosse um único fluoróforo com as propriedades de excitação do dador e as propriedades de emissão do aceitador. Isto é possível através do fenómeno de transferência de energia de ressonância de Förster (FRET), também conhecida como a transferência de energia de ressonância de fluorescência. Isto permite que um fluoróforo para passar a sua energia de excitação a um fluoróforo vizinho, que, em seguida, emite-se o fotão de luz. Esta transferência de energia é dependente da proximidade e da orientação das moléculas dadora e aceitadora.
Observações importantes:
FRET eficiência nunca é 100%, o que significa que haverá sempre alguma emissão bleedthrough do dador que é observado. Isto é dependente da qualidade dos conjugados em tandem. Certifique-se de usar controles isotipo e controles de cor única para apropriadamente ajustar suas configurações de compensação.
Tandems são vulgarmente conhecidos por “degradação” ou “descolamento”, que descreve a perda de emissão do aceitador e maior emissão do dador. Porque tandems são ligados covalentemente, o dador e aceitador normalmente não se separam em solução. Há várias causas potencialmente que induzem a perda de FRET o aceitador. A primeira é a exposição à luz, que é conhecido por Fotobranqueador ambas as moléculas dador / aceitador. Radicais de oxigénio também causar danos aos corantes aceitadores. Ambas as condições seria irreversível e que conferem a perda da função para o conjunto.
Ao utilizar tandems em multicolor citometria de fluxo, é fundamental usar controles isotipo para o fundo, controles de cor individuais para compensação, e FMO (Fluorescence-menos-um) controla a electrónica.

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